PNGase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425553

Panoramica

Ngly1 del topo codifica la peptide:N-glicanasi (PNGasi), un enzima citosolico deglicosilante che rimuove i glicani N-linked dalle glicoproteine mal ripiegate retrotraslocate dal reticolo endoplasmatico. Questa attività è parte integrante della degradazione associata al RE (ERAD), poiché accoppia la deglicosilazione allo smaltimento tramite ubiquitina–proteasoma e modella la proteostasi in condizioni di stress della risposta alle proteine non ripiegate (unfolded protein response). NGLY1 partecipa anche alla regolazione del processamento di NRF1/NFE2L1, collegando la deglicosilazione a programmi di adattamento cellulare che controllano l’espressione dei geni del proteasoma e la resilienza allo stress. L’alterazione della funzione della N-glicanasi è ampiamente rilevante per i meccanismi di stress proteotossico, controllo qualità proteico e per i fenotipi neuroevolutivi osservati nella biologia correlata a NGLY1.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PNGase (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ngly1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ngly1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ngly1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PNGase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ngly1 per lo studio della segnalazione di PNGase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ngly1 critici per la funzione di PNGase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ngly1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PNGase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PNGase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ngly1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PNGase Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PNGase (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ngly1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ngly1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.