Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
PNGase CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-425553
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- PNGase CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在PNGase基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
PNGase CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-425553 | 20 µg | $397.00 |
概述
小鼠 Ngly1 编码肽：N-糖苷酶（PNGase），这是一种位于细胞质的去糖基化酶，可将从内质网逆向转运（retrotranslocated）出来的错误折叠糖蛋白上的 N-连接型糖链去除。该活性是内质网相关降解（ERAD）的关键组成部分，将去糖基化与泛素–蛋白酶体途径介导的降解相耦联，并在未折叠蛋白反应（UPR）应激条件下塑造蛋白稳态（proteostasis）。NGLY1 还参与 NRF1/NFE2L1 的加工调控，将去糖基化与细胞适应性程序连接起来，从而调控蛋白酶体基因表达与应激抗性。N-糖苷酶功能受损与蛋白毒性应激、蛋白质质量控制机制以及 NGLY1 相关生物学中观察到的神经发育表型密切相关。
PNGase CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Ngly1基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Ngly1基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Ngly1开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使PNGase蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Ngly1缺失的细胞模型，用于PNGase信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 PNGase 功能至关重要的 Ngly1 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Ngly1 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 PNGase CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 PNGase CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Ngly1 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 PNGase HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 PNGase HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Ngly1同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Ngly1靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。