PMCA2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403416-ACT

ATP2B2は、細胞膜Ca2+ ATPaseのアイソフォームであるPMCA2をコードしており、細胞質内カルシウム濃度を低く保ち、刺激依存的なCa2+トランジェントの形成に関与する高親和性のCa2+排出ポンプです。PMCA2はATP加水分解とCa2+の細胞外排出を共役させることで、神経細胞の興奮性、シナプス伝達、上皮の輸送過程を調節するカルシウム依存性シグナル伝達ネットワークを支えます。PMCA2の活性は、カルモジュリン制御経路、膜マイクロドメインにおけるシグナル伝達、ならびにCa2+駆動性のプロテオトキシックストレスやミトコンドリアストレスを防ぐ恒常性フィードバックと交差します。ATP2B2/PMCA2の発現や機能の変化は、神経学的表現型や感覚系の機能障害に関与するとされるカルシウム恒常性の破綻と関連づけられており、Ca2+シグナル伝達の機序研究における重要性を示しています。

PMCA2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATP2B2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PMCA2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATP2B2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATP2B2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PMCA2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATP2B2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPMCA2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATP2B2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPMCA2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。