PLIC-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404783-NIC

UBQLN2 codifica ubiquilin-2 (PLIC-2), una proteina dotata di domini ubiquitin-like e ubiquitin-associated che trasporta i substrati poliubiquitinati al proteasoma 26S e interagisce con la degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD) e con l’autofagia. PLIC-2 supporta il controllo di qualità proteico collegando il carico ubiquitinato al proteasoma, influenzando la degradazione di proteine mal ripiegate o inclini all’aggregazione e mantenendo la proteostasi durante lo stress cellulare. La disregolazione delle vie di smaltimento dipendenti da UBQLN2 è stata associata a fenotipi neurodegenerativi caratterizzati da inclusioni positive per ubiquitina e da una funzione del proteasoma compromessa, rendendolo un bersaglio rilevante per modellare difetti di proteostasi nelle cellule umane. Nella ricerca biomedica, la perturbazione di UBQLN2 viene utilizzata per studiare la segnalazione dell’ubiquitina, la biologia dei granuli di stress e degli aggregati e la comunicazione tra degradazione proteasomiale e flusso autofagico.

PLIC-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UBQLN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UBQLN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UBQLN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UBQLN2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.