plexin-A2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403886-ACT

PLXNA2 は、ヒトのプレキシンA2受容体をコードしており、セマフォリンのシグナルを伝達して細胞骨格の再構築、細胞接着、ならびに方向性のある遊走を制御する膜貫通型のガイダンス分子です。プレキシンA2は、RhoファミリーGTPアーゼや、それに続く神経突起の伸長、軸索誘導、シナプス構築を制御する下流経路と連携するセマフォリン–プレキシンのシグナル伝達ネットワークで機能します。神経の発生や可塑性における役割に加えて、PLXNA2関連シグナルは、細胞運動性や組織パターニングの変化を伴う状況でも研究されています。セマフォリン／プレキシン経路の構成因子の機能異常は、神経発達表現型との関連や、疾患関連の細胞モデルにおける経路再配線との関係を調べる目的で、しばしば検討されています。

plexin-A2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLXNA2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

plexin-A2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLXNA2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLXNA2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性plexin-A2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLXNA2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるplexin-A2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLXNA2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるplexin-A2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。