PLEKHA5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408239

Panoramica

PLEKHA5 codifica una proteina adattatrice contenente un dominio di omologia alla pleckstrina, associata alla segnalazione prossimale alla membrana e all’organizzazione del citoscheletro, e supporta il controllo spaziale dei complessi proteici nelle cellule polarizzate. Collegando domini di membrana ricchi di fosfoinositidi a fattori regolatori, PLEKHA5 è stata associata a processi quali il traffico vescicolare, la morfologia cellulare e la modulazione dipendente dal contesto della segnalazione proliferativa. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di PLEKHA5 sono state riportate in studi di genomica ed espressione nel cancro, in linea con possibili ruoli nel controllo del ciclo cellulare e in fenotipi migratori. Queste caratteristiche rendono PLEKHA5 un bersaglio utile per analizzare nodi di segnalazione dipendenti dalla membrana che influenzano la crescita e il comportamento cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PLEKHA5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PLEKHA5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PLEKHA5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PLEKHA5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PLEKHA5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PLEKHA5 per lo studio della segnalazione di PLEKHA5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PLEKHA5 critici per la funzione di PLEKHA5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PLEKHA5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PLEKHA5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PLEKHA5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PLEKHA5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PLEKHA5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PLEKHA5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PLEKHA5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PLEKHA5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.