Plásmido Doble Nickase (h) Plectin: sc-401494-NIC

PLEC codifica plectina, una gran proteína citoligadora que integra los filamentos intermedios con la actina, los microtúbulos y complejos asociados a la membrana para estabilizar la arquitectura celular bajo estrés mecánico. La plectina organiza los hemidesmosomas, las adhesiones focales y las redes asociadas a desmosomas, lo que sostiene la integridad epitelial, la resistencia de las fibras musculares y la organización del citoesqueleto neuronal. A través de estas funciones de andamiaje, la plectina influye en procesos que incluyen la adhesión celular, la migración, la mecanotransducción y el mantenimiento de la dinámica del citoesqueleto. La desregulación o las mutaciones de PLEC se asocian con trastornos que afectan la integridad de la piel y el músculo, y se han investigado en el contexto de la invasión de células cancerosas y de alteraciones en la mecánica tisular.

Plectin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PLEC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PLEC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PLEC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PLEC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.