plakophilin 3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403614-ACT

PKP3はプラコフィリン3をコードする遺伝子で、アルマジロリピートをもつタンパク質です。プラコフィリン3はデスモソームに局在し、デスモソーム型カドヘリン—プラコグロビン複合体を安定化するとともに、接着結合体を中間径フィラメントへ連結することで、上皮細胞間接着を支持します。デスモソームの組み立てや接着装置のリモデリングを調節することを通じて、プラコフィリン3は組織の完全性、極性、ならびに細胞骨格の編成を協調させるメカノトランスダクション経路に寄与します。PKP3発現の変化やデスモソーム機能不全は、上皮バリアの破綻や、移動・浸潤プログラムの変化を含むがん関連表現型と関連づけられています。これらの特性により、PKP3は接着結合の生物学、細胞骨格シグナル、そして接着刺激に対する状況依存的な転写応答を研究するうえで有用なノードとなります。

plakophilin 3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PKP3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

plakophilin 3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PKP3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPKP3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性plakophilin 3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPKP3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるplakophilin 3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPKP3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるplakophilin 3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。