PKC lambda/iota Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402111-ACT

PRKCI codifica a isoforma atípica da proteína quinase C, PKC lambda/iota, uma quinase de serina/treonina que atua em complexos de polaridade e de sinalização para regular a organização epitelial, a divisão celular assimétrica e a dinâmica do citoesqueleto. Atuando a jusante de sinais mediados por fosfoinositídeos e pequenas GTPases, PRKCI participa da sinalização de polaridade Par3–Par6 e se conecta a vias que controlam a sobrevivência celular, a migração e a integridade das junções celulares. A atividade ou expressão desregulada de PRKCI tem sido associada a programas de polaridade alterados e à sinalização proliferativa em diversos contextos de doença, incluindo fenótipos relacionados ao câncer, como invasão e resistência a sinais apoptóticos. Essas características tornam PRKCI um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização dependente de polaridade, respostas ao estresse e transições de estado celular.

PKC lambda/iota O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRKCI sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PKC lambda/iota O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRKCI em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRKCI, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PKC lambda/iota. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRKCI nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PKC lambda/iota no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PKC lambda/iota em células tumorais com expressão de PRKCI silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.