PKC delta CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400287-ACT

PRKCDは、ジアシルグリセロールに応答するセリン／スレオニンキナーゼであるプロテインキナーゼCデルタ（PKCδ）をコードしており、受容体を介して入力されたシグナルを、増殖・分化・アポトーシス・細胞骨格リモデリングを制御する下流のリン酸化プログラムへと結び付けます。PKCδはPKC/MAPK系およびPI3K–AKT系のクロストークに関与し、NF-κB依存性の炎症シグナルを調節するとともに、ストレス応答因子やチェックポイント因子のリン酸化を通じてDNA損傷応答を制御します。免疫細胞や造血系細胞では、PRKCDはB細胞受容体シグナルと免疫寛容の調整に寄与し、一方で上皮系の文脈では接着や遊走挙動に影響します。PRKCDの活性や発現の破綻は、アポトーシス閾値の変化、炎症性表現型、腫瘍性シグナル伝達の再配線と関連付けられており、経路中心の機構研究において重要なノードとなります。

PKC delta CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRKCDの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PKC delta CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRKCD 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRKCD転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PKC deltaの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRKCD遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPKC delta依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRKCD発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPKC delta経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。