PITHD1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412754-ACT

ヒトPITHD1（SOPD1とも呼ばれる）は、プロテアソームに関連する小型の因子をコードしており、ユビキチン標識された基質の分解を促進することでタンパク質品質管理に寄与します。プロテアソーム機能の調節や、ストレス応答および短寿命の調節タンパク質のターンオーバーを規定する細胞内プロテオスタシス経路との関連が示されています。ユビキチン–プロテアソーム系における役割を通じて、PITHD1は転写制御、細胞周期の進行、ならびにプロテオトキシックストレスへの適応に関する研究で重要です。プロテオスタシスの破綻は、がん研究および神経変性研究の文脈に共通して見られる特徴であるため、PITHD1はプロテアソーム依存的表現型の機構解明に有用な標的（ノード）となります。

PITHD1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PITHD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PITHD1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PITHD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPITHD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PITHD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPITHD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPITHD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPITHD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPITHD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。