PiT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403121

概要

SLC20A1はPiT1をコードしており、PiT1は全身のさまざまな組織で発現するIII型のナトリウム依存性リン酸共輸送体である。PiT1は無機リン酸の取り込みを調節し、ヌクレオチド合成、膜リン脂質の産生、ならびに細胞のエネルギー代謝（バイオエナジェティクス）を支える。さらにPiT1は、ERK/MAPKや細胞周期制御など、リン酸恒常性に連動するシグナル伝達ネットワークに影響を及ぼし、リン酸感受性の転写プログラムを介して骨芽細胞分化や石灰化（ミネラリゼーション）過程にも関与するとされる。SLC20A1活性の変化は、増殖制御の破綻やストレス応答の異常と関連づけられており、リン酸の利用可能性が増殖・生存表現型を左右し得ることから、血管石灰化、代謝リモデリング、腫瘍生物学といった文脈で頻繁に研究されている。

PiT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC20A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC20A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC20A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PiT1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PiT1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC20A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PiT1の機能に不可欠なSLC20A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC20A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PiT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPiT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC20A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PiT1 HDRプラスミド（h）および PiT1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC20A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC20A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。