PiT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403121

Panoramica

SLC20A1 codifica PiT1, un simportatore di fosfato di tipo III dipendente dal sodio, espresso in modo ubiquitario, che regola l’assorbimento di fosfato inorganico per sostenere la sintesi di nucleotidi, la produzione di fosfolipidi di membrana e la bioenergetica cellulare. PiT1 influenza le reti di segnalazione legate all’omeostasi del fosfato, incluse ERK/MAPK e il controllo del ciclo cellulare, ed è coinvolto nella differenziazione osteogenica e nei processi di mineralizzazione attraverso programmi trascrizionali sensibili al fosfato. Un’attività alterata di SLC20A1 è stata associata a proliferazione deregolata e risposte allo stress ed è spesso studiata nel contesto della calcificazione vascolare, del rimodellamento metabolico e della biologia dei tumori, in cui la disponibilità di fosfato può modellare i fenotipi di crescita e sopravvivenza.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PiT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC20A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC20A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC20A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PiT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC20A1 per lo studio della segnalazione di PiT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC20A1 critici per la funzione di PiT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC20A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PiT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PiT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC20A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PiT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PiT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC20A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC20A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.