PiT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403121-ACT

SLC20A1は、細胞膜に存在するナトリウム依存性の無機リン酸（Pi）トランスポーターであるPiT1（SLC20A1）をコードしており、ヌクレオチド合成、リン脂質代謝、ならびにATP依存的な生体エネルギー産生に必要なリン酸取り込みを支えています。輸送機能にとどまらず、PiT1は細胞増殖の制御や栄養センシングにも関与し、細胞外のリン酸利用性を細胞内の代謝プログラムや細胞周期の進行に結び付けます。SLC20A1の発現変動は、リン酸恒常性の破綻、異常増殖、ストレス応答といった文脈で研究されており、Piフラックスがシグナル伝達ネットワークや石灰化関連プロセスに影響し得ることが示されています。広範な細胞種で発現するヒトトランスポーターとして、PiT1は多様な細胞タイプにおけるリン酸依存的な代謝および遺伝子発現制御を解析するための有用な標的となります。

PiT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC20A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PiT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC20A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC20A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PiT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC20A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPiT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC20A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPiT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。