PIPK I α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403490-ACT

PIP5K1A codifica a fosfatidilinositol-4-fosfato 5-quinase tipo I alfa (PIPK I α), uma quinase lipídica fundamental que gera fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PI(4,5)P2) na membrana plasmática e em endomembranas. O PI(4,5)P2 atua como precursor de segundos mensageiros na sinalização por fosfoinositídeos e também regula diretamente a remodelação do citoesqueleto de actina, a endocitose mediada por clatrina, o tráfego de membranas e a dinâmica das adesões focais. Ao controlar a disponibilidade de PI(4,5)P2, a PIPK I α influencia nós de sinalização que incluem as vias PLC/PKC e PI3K–AKT e sustenta a organização espacial da sinalização acionada por receptores. A desregulação do metabolismo de fosfoinositídeos e a atividade alterada de PIP5K1A têm sido associadas à migração celular aberrante, a fenótipos invasivos e a contextos de sinalização oncogênica, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de programas de proliferação e motilidade.

PIPK I α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIP5K1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PIPK I α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIP5K1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIP5K1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PIPK I α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIP5K1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PIPK I α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PIPK I α em células tumorais com expressão de PIP5K1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.