PINK1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400739-NIC

PINK1（PTEN-induced kinase 1）は、ミトコンドリアに局在するセリン／スレオニンキナーゼをコードしており、ミトコンドリア損傷の主要なセンサーとして、またオルガネラの品質管理を制御する因子として機能します。ミトコンドリア膜電位が失われると、PINK1はミトコンドリア外膜上に蓄積し、PARKIN依存的にミトコンドリア基質のユビキチン化を促進することで、マイトファジーを開始し、ミトコンドリア動態の再構築を引き起こします。この経路を介してPINK1は、酸化ストレス応答、バイオエネルギー恒常性、ならびにミトコンドリア機能障害に関連する炎症性シグナル伝達に影響を与えます。PINK1活性の破綻は若年性パーキンソン病と強く関連しており、神経変性およびミトコンドリア病態のモデルで広く研究されています。

PINK1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PINK1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PINK1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PINK1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PINK1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。