PINK1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-427236-ACT

Pink1はPTEN-induced putative kinase 1（PINK1）をコードしており、PINK1はミトコンドリアの脱分極を感知するセンサーとして機能し、マイトファジー開始の鍵となるミトコンドリアSer/Thrキナーゼである。ミトコンドリア膜電位が失われると、PINK1はミトコンドリア外膜に蓄積し、リン酸化反応を促進してPARK2/parkinのリクルートと活性化を助け、ユビキチン依存的に損傷ミトコンドリアの除去を導く。この経路は、ミトコンドリア品質管理を細胞ストレス応答、バイオエネルゲティクス、自然免疫シグナルと統合する。PINK1依存的なマイトファジーおよびミトコンドリア恒常性の破綻は、酸化ストレスやプロテオスタシス障害など、神経変性やパーキンソン病に関連する機序と強く結び付いている。

PINK1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Pink1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PINK1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Pink1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPink1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PINK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPink1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPINK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPink1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPINK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。