Pinin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405373-ACT

ヒトPNNは、核およびデスモソームに局在するタンパク質であるpininをコードしており、上皮細胞間接着と、転写およびRNAプロセシングのプログラムを結び付けます。PininはmRNAスプライシングやエクソン結合複合体（EJC）関連の過程に関与し、選択的スプライシングの結果や、上皮の分化と組織の恒常性を形作る遺伝子発現ネットワークに影響を与えます。デスモソームの構築、核スペックル、転写産物成熟の制御といった役割を通じて、PNNは細胞極性、遊走、ストレス応答性の遺伝子制御に関わる経路を調節し得ます。PNNの発現量や局在の変化は上皮表現型の変化と関連しており、腫瘍の進行、転移関連の転写プログラム、ならびに接着やスプライシングの異常を伴う他の疾患の文脈で研究されています。

Pinin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PNNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Pinin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PNN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPNN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Pininの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPNN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPinin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPNN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPinin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。