PIMT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407101

Panoramica

Il gene umano **TGS1** codifica la **trimetilguanosina sintasi 1 (PIMT)**, una metiltransferasi dipendente da SAM che converte il cappuccio **2,2,7-trimetilguanosina (TMG)** su snRNA e altri piccoli RNA nucleari. Questa modifica favorisce la maturazione degli snRNP, l’importazione nel nucleo e la funzione dello spliceosoma, collegando l’attività di TGS1 alla fedeltà dello splicing del pre-mRNA e a reti più ampie di processamento dell’RNA. TGS1 interagisce anche con i sistemi di controllo qualità dell’RNA e con le vie di biogenesi dei ribonucleoproteini che influenzano la proteostasi e le risposte allo stress. La disregolazione del metabolismo dell’RNA e dei programmi associati allo splicing coinvolge TGS1/PIMT in meccanismi rilevanti per la neurodegenerazione, la biologia del cancro e i fenotipi dello sviluppo, rendendolo un nodo utile per studi focalizzati sulle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PIMT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TGS1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TGS1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TGS1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PIMT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TGS1 per lo studio della segnalazione di PIMT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TGS1 critici per la funzione di PIMT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TGS1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PIMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PIMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TGS1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PIMT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PIMT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TGS1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TGS1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.