CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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PI 3-kinase p110α Double Nickaseプラスミド (h): sc-416642-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PI 3-kinase p110α Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PI 3-kinase p110αダブルニカースプラスミド（h）およびPI 3-kinase p110αダブルニカースプラスミド（h2）は、PIK3CAを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PI 3-kinase p110α 抗体 (E-7): sc-518070
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PI 3-kinase p110α Double Nickaseプラスミド (h) | sc-416642-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI 3-kinase p110α Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-416642-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIK3CAは、クラスIホスホイノシチド3-キナーゼ（PI3K）の触媒サブユニットであるp110αをコードしており、細胞膜上でPIP2をリン酸化してPIP3を産生します。この脂質シグナル伝達によりAKTがリクルートされ活性化されるとともに、mTORを含む下流エフェクターが活性化され、増殖因子によって駆動される細胞増殖、代謝、生存、ならびに細胞骨格動態の制御が統合的に調節されます。PI3K/AKT/mTORシグナルは、受容体型チロシンキナーゼやRAS、さらに細胞のストレス応答や栄養センシングを形作るフィードバックループとも相互に連関しています。PIK3CA活性の変化は、がん化をもたらすシグナルネットワークの破綻、グルコース利用の変容、異常な細胞遊走といった文脈で、しばしば研究対象となります。
PI 3-kinase p110α ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PIK3CA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PIK3CA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PIK3CAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PIK3CAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。