PHIP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407159

Panoramica

PHIP (pleckstrin homology domain interacting protein) codifica una proteina “scaffold” nucleare e citoplasmatica che si associa sia alla segnalazione mediata dagli insulin receptor substrate sia a complessi associati alla cromatina, influenzando i programmi trascrizionali e la regolazione dello stato cellulare. Attraverso interazioni collegate alla via PI3K–AKT e alla regolazione dell’espressione genica, PHIP contribuisce al controllo della crescita cellulare, delle risposte metaboliche e della progressione del ciclo cellulare. Alterazioni genetiche o un’espressione deregolata di PHIP sono state riportate in molteplici tumori e sono studiate per le loro relazioni con la proliferazione e l’invasività delle cellule tumorali e con i fenotipi di risposta ai trattamenti. Inoltre, PHIP è stato implicato in disturbi del neurosviluppo, a sostegno della sua rilevanza in vie che accoppiano input di segnalazione a output trascrizionali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PHIP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PHIP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PHIP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PHIP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PHIP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PHIP per lo studio della segnalazione di PHIP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PHIP critici per la funzione di PHIP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PHIP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PHIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PHIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PHIP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PHIP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PHIP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PHIP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PHIP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.