PHF19 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408215-ACT

PHF19（PHDフィンガータンパク質19）は、クロマチン関連の制御因子であり、Polycomb抑制複合体2（PRC2）と連携してH3K27me3の付加（沈着）を調節し、転写抑制プログラムの維持に寄与します。エピジェネティックな「リーダー」としての機能およびリクルート機能を介して、PHF19はクロマチンのアクセシビリティと遺伝子発現状態を形作ることで、細胞のアイデンティティ、増殖、分化の制御に関与します。PHF19の発現異常やPRC2に結び付いたクロマチン経路の破綻は、複数のがんの文脈において、腫瘍性の転写プログラムや系譜決定（ラインエージ・コミットメント）の異常に関与すると示唆されています。Polycombを介したサイレンシングの結節点として、PHF19は発生関連遺伝子ネットワーク、クロマチンリモデリング、転写可塑性への影響という観点から、しばしば研究対象となっています。

PHF19 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PHF19の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PHF19 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PHF19 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPHF19転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PHF19の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPHF19遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPHF19依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPHF19発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPHF19経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。