PFKFB4 Plasmide Double Nickase (h): sc-410933-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PFKFB4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PFKFB4 Double Nickase Plasmid (h) e il PFKFB4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PFKFB4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PFKFB4 Antibody (A-1): sc-514792
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PFKFB4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410933-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PFKFB4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410933-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PFKFB4 codifica la 6-fosfofrutto-2-chinasi/fruttosio-2,6-bisfosfatasi 4, un enzima bifunzionale che controlla i livelli cellulari di fruttosio-2,6-bisfosfato, un potente attivatore allosterico della PFK-1 e un regolatore chiave del flusso glicolitico. Modulando l’equilibrio tra glicolisi e via dei pentoso fosfati, PFKFB4 sostiene l’omeostasi bioenergetica, il controllo redox tramite la produzione di NADPH e la disponibilità di precursori biosintetici. L’attività di PFKFB4 collega il sensing dei nutrienti alla riprogrammazione metabolica e può influenzare la proliferazione, la sopravvivenza in condizioni di stress e le risposte all’ipossia. Un’espressione o una funzione deregolata di PFKFB4 è stata associata a fenotipi metabolici alterati osservati nel cancro e in altri disturbi caratterizzati da un metabolismo del glucosio perturbato.
PFKFB4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PFKFB4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PFKFB4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PFKFB4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PFKFB4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.