Peroxin 14 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405075-NIC

PEX14はペルオキシソーム膜の必須構成要素であるペルオキシン14をコードしており、PTS1およびPTS2の標的化シグナルをもつマトリックス酵素の取り込みの際に、PEX5およびPEX7受容体複合体のドッキング因子として機能する。この役割を通じて、PEX14はペルオキシソームの生合成、オルガネラのプロテオスタシス維持、ならびに超長鎖脂肪酸のβ酸化や細胞のレドックス恒常性などの代謝経路において中心的な役割を担う。PEX14依存的な取り込みが障害されるとペルオキシソーム代謝が破綻し、二次的にミトコンドリア機能、脂質シグナル伝達、活性酸素種（ROS）の制御にも影響が及びうる。ペルオキシソームの組み立てや輸送（インポート）機構の破綻は、ペルオキシソーム生合成異常症に関与するほか、神経発達や代謝機能障害に関連するより広範なメカニズムとも結び付けられている。

Peroxin 14 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PEX14 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PEX14内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PEX14の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PEX14が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。