Perilipin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401305-ACT

PLIN1は、脂肪滴に結合する足場タンパク質であるペリリピン1をコードしており、ATGLやホルモン感受性リパーゼなどのリパーゼがトリアシルグリセロールへアクセスするのを制御することで、脂肪細胞における中性脂質の貯蔵と動員を調節します。ペリリピンはリン酸化依存的なリモデリングを介して、cAMP/PKAシグナル伝達を脂肪分解・脂肪合成プログラムと統合し、脂肪酸フラックス、脂肪細胞サイズ、脂肪滴ダイナミクスを規定します。PLIN1の発現や機能の変化は、脂肪組織の恒常性破綻、インスリン抵抗性に関連する代謝表現型、ならびに脂肪萎縮症様の症状と関連づけられており、脂肪細胞生物学および全身のエネルギーバランス研究における重要な結節点とされています。細胞モデルでは、PLIN1活性は、ミトコンドリアの基質利用を制御する経路、脂質過負荷に対する小胞体ストレス応答、異所性脂質蓄積によって駆動される炎症性シグナル伝達などの経路と交差します。

Perilipin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLIN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Perilipin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLIN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLIN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Perilipinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLIN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPerilipin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLIN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPerilipin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。