Per1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401260

Panoramica

PER1 codifica la proteina Period 1, un componente fondamentale dell’orologio circadiano molecolare che partecipa a circuiti di retroazione trascrizione–traduzione che controllano l’espressione genica ritmica sulle 24 ore. PER1 interagisce con altri regolatori dell’orologio per modulare la trascrizione guidata da CLOCK/ARNTL (BMAL1), collegando la temporizzazione circadiana al controllo del ciclo cellulare, alle risposte al danno del DNA, al metabolismo e alla segnalazione ormonale. Attraverso queste reti, PER1 influenza il coordinamento temporale delle vie cellulari di stress e l’omeostasi mitocondriale e redox. La disregolazione dell’espressione o della ritmicità di PER1 è stata associata ad alterazioni della fisiologia sonno–veglia ed è stata riportata in studi sulla biologia dei tumori, sui disturbi metabolici e sui meccanismi delle malattie neuropsichiatriche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Per1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PER1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PER1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PER1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Per1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PER1 per lo studio della segnalazione di Per1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PER1 critici per la funzione di Per1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PER1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Per1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Per1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PER1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Per1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Per1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PER1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PER1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.