Peg10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406028-ACT

PEG10 (gene 10 expresso paternalmente) codifica a Peg10, uma proteína domesticada derivada de retrotransposon, implicada no desenvolvimento placentário, na sobrevivência celular e na regulação da proliferação. A Peg10 tem sido associada ao turnover proteico dependente de ubiquitina e a interações com programas regulatórios transcricionais e pós-transcricionais, sustentando papéis na resistência à apoptose e no controle do ciclo celular. A expressão desregulada de PEG10 é frequentemente observada no câncer e em outras doenças proliferativas ou do desenvolvimento, o que a torna um alvo útil para investigar vias que governam crescimento, diferenciação e respostas ao estresse. Em modelos de células humanas, PEG10 serve como um nó acessível para estudar redes transcricionais específicas de linhagem e as consequências da superexpressão aberrante de genes endógenos.

Peg10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PEG10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Peg10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PEG10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PEG10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Peg10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PEG10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Peg10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Peg10 em células tumorais com expressão de PEG10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.