Peg10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406028-ACT

PEG10（paternally expressed gene 10）は、レトロトランスポゾン由来タンパク質が家畜化された産物であるPeg10をコードし、胎盤形成、細胞生存、ならびに増殖の制御に関与するとされています。Peg10は、ユビキチン依存的なタンパク質分解（ターンオーバー）や、転写・転写後の制御プログラムとの相互作用に関連づけられており、アポトーシス抵抗性や細胞周期制御における役割を支持する知見が示されています。PEG10の発現異常は、がんやその他の増殖性／発生性疾患でしばしば観察されるため、成長・分化・ストレス応答を司る経路を解析するうえで有用な標的となります。ヒト細胞モデルでは、PEG10は系譜特異的な転写ネットワークや、内在性遺伝子の異常な発現亢進がもたらす影響を研究するための扱いやすい結節点（ノード）として位置づけられています。

Peg10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PEG10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Peg10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PEG10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPEG10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Peg10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPEG10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPeg10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPEG10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPeg10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。