Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PEBP2β Double Nickaseプラスミド (h): sc-401983-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PEBP2β Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PEBP2βダブルニカースプラスミド（h）およびPEBP2βダブルニカースプラスミド（h2）は、CBFBを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PEBP2β 抗体 (141,4,1): sc-56751
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PEBP2β Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401983-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PEBP2β Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401983-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBFB は core-binding factor subunit beta（PEBP2β）をコードしており、DNA には直接結合しないパートナーとして RUNX 転写因子とヘテロ二量体を形成し、DNA 結合の安定化と、造血・骨形成・免疫細胞分化に必要な転写プログラムの制御に関与します。RUNX/CBF 複合体を介して、CBFB は系譜特異的な遺伝子発現、細胞周期制御、発生パターン形成に影響を与え、増殖と分化を協調させる経路と結び付けられています。CBFB の破綻や再構成は転写の忠実性を損ない、血液腫瘍の生物学と関連することから、分化停止や異常な転写制御を研究するうえでの重要な結節点となります。RUNX の補因子としての役割は、系譜決定を制御する下流標的やクロマチン関連機構を解析するための枠組みも提供します。
PEBP2β ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CBFB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CBFB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CBFBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CBFBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。