PDPK1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401731-ACT

ヒトPDPK1（3-ホスホイノシチド依存性プロテインキナーゼ1）は、ホスホイノシチドシグナル伝達をリン酸化による増殖・生存制御へと結び付ける、AGCファミリーの中核的キナーゼである。PI3Kの下流でPIP3への結合を介して活性化され、AKTのThr308をはじめ、S6K、SGK、各種PKCアイソフォームなど複数のAGCキナーゼをリン酸化することで、代謝、タンパク質合成、細胞周期進行、ストレス応答を制御するシグナル入力を統合する。これらの結節点を通じて、PDPK1はmTOR関連の出力や、系譜決定および細胞可塑性に影響するより広範なキナーゼネットワーク動態を調節する。PDPK1シグナルの異常は、がんにおけるPI3K–AKT経路の腫瘍性活性化や、がん生物学およびインスリン応答性組織に関連する代謝表現型の文脈で、しばしば研究対象となっている。

PDPK1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDPK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PDPK1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDPK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDPK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PDPK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDPK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPDPK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDPK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPDPK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。