Particules Lentivirales d'Activation (h) PDK4: sc-401355-LAC

La PDK4 humaine (pyruvate dehydrogenase kinase 4) est une kinase mitochondriale sérine/thréonine qui phosphoryle et inhibe le complexe pyruvate déshydrogénase, réduisant la conversion du pyruvate en acétyl‑CoA et détournant le flux de carbone de l’oxydation du glucose. En modulant l’équilibre entre glycolyse, gluconéogenèse et oxydation des acides gras, PDK4 intègre des signaux nutritionnels et hormonaux au sein de voies qui régissent l’homéostasie énergétique cellulaire. L’expression de PDK4 répond au jeûne, aux glucocorticoïdes et à la signalisation des PPAR, et elle influence le métabolisme mitochondrial ainsi que l’état rédox. Une activité de PDK4 dérégulée a été associée à des phénotypes métaboliques liés à la résistance à l’insuline, à la stéatose hépatique et à des altérations du métabolisme oxydatif observées dans divers contextes pathologiques.

Les particules d'activation lentivirales PDK4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PDK4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PDK4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PDK4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PDK4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PDK4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.