PDK4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401355-ACT

ヒトPDK4は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ4（PDK4）をコードしており、ミトコンドリアに局在するキナーゼとしてピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体をリン酸化して阻害します。これにより、ピルビン酸のTCA回路への流入を制限し、脂肪酸酸化へと代謝を切り替える方向に促します。PDK4の発現は、絶食、グルココルチコイド、PPARシグナルによって動的に制御され、栄養状態のセンシングとミトコンドリアの生体エネルギー機能および細胞内レドックスバランスを統合します。解糖系フラックスと酸化的代謝のバランスを調節することで、PDK4は代謝活性の高い組織におけるインスリン応答性や脂質の取り扱いにも影響します。PDK4活性や転写制御の破綻は代謝ストレス表現型と関連づけられており、インスリン抵抗性、脂肪肝（脂肪変性）、腫瘍細胞における代謝プログラミングの変化などの文脈で頻繁に研究されています。

PDK4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDK4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PDK4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDK4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDK4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PDK4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDK4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPDK4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDK4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPDK4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。