Plasmide Double Nickase (h) PDK1: sc-401084-NIC

La pyruvate déshydrogénase kinase 1 (PDK1) est une kinase mitochondriale Ser/Thr qui phosphoryle et inhibe le complexe pyruvate déshydrogénase, détournant ainsi le flux de carbone de la production d’acétyl-CoA vers un métabolisme glycolytique. En limitant l’entrée du pyruvate dans le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs), PDK1 contribue à la flexibilité métabolique en situation d’hypoxie et de stress nutritif, et elle est régulée en aval de voies telles que la signalisation HIF‑1. Une activité altérée de PDK1 a été impliquée dans une dérégulation de l’oxydation du glucose, de la fonction mitochondriale et de l’équilibre rédox, des processus fréquemment perturbés dans le métabolisme tumoral, le remodelage métabolique associé au diabète et d’autres affections caractérisées par une phosphorylation oxydative modifiée. Par conséquent, PDK1 est largement étudiée dans des contextes reliant l’état métabolique à la prolifération, à la survie et à l’adaptation au stress.

PDK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PDK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PDK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PDK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PDK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.