PDGF-A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400711-ACT

PDGFAは、血小板由来増殖因子A（platelet-derived growth factor A：PDGF-A）をコードする遺伝子であり、主にPDGFRαを介してシグナルを伝達する分泌性の二量体リガンドです。PDGF-Aは、間葉系細胞の増殖・生存・方向性のある移動を制御します。また、RAS–MAPK、PI3K–AKT、PLCγ依存性経路などの受容体型チロシンキナーゼのシグナル伝達カスケードを活性化することで、発生過程の形態形成や組織リモデリングに寄与します。成人組織では、PDGF-A/PDGFRシグナルの異常な制御が、異常な間質活性化、線維芽細胞の増殖、炎症や腫瘍–間質相互作用に影響する細胞外マトリックスの再構築と関連します。そのためPDGFA発現は、血管新生や線維化プログラム、創傷治癒、増殖因子によって駆動される細胞状態変化といった文脈で頻繁に研究されています。

PDGF-A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDGFAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PDGF-A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDGFA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDGFA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PDGF-Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDGFA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPDGF-A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDGFA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPDGF-A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。