Partículas Lentivirales de Activación (m) PDE4B: sc-422161-LAC

El gen murino *Pde4b* codifica la fosfodiesterasa específica de AMPc PDE4B, un regulador clave de la señalización intracelular mediada por segundos mensajeros que pone fin a las respuestas al AMPc al hidrolizarlo a 5′-AMP. Al modular la transcripción dependiente de AMPc/PKA/CREB y la retroalimentación hacia la señalización MAPK, PDE4B influye en la integración de señales impulsadas por receptores y en los umbrales de activación celular. La actividad de PDE4B contribuye a la modulación de redes de señalización inflamatoria, incluidas las vías aguas abajo de la estimulación por citocinas y receptores tipo Toll, y se estudia con frecuencia en el contexto de la función de las células inmunitarias. La desregulación de la expresión o la señalización de PDE4B se ha relacionado con fenotipos inflamatorios y procesos neuroinmunes, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de vías relevantes para enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral PDE4B (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Pde4b en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PDE4B (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Pde4b, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PDE4B. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Pde4b y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.