PDE2A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401957-ACT

ヒトPDE2Aは、cAMPとcGMPの両方を加水分解する二基質性の環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼであるホスホジエステラーゼ2Aをコードし、一酸化窒素（NO）–cGMPシグナルをcAMP依存性経路へと連結します。PDE2Aは環状ヌクレオチドの濃度勾配を形成することで、PKA/PKGシグナル伝達、カルシウム制御、ならびに下流の転写プログラムを調節し、その結果として神経興奮性やシナプス可塑性、さらに血管および心臓の応答に影響を与えます。PDE2A活性は、cAMP/CREBをはじめとする関連シグナル伝達ノードを介して、ミトコンドリアおよび炎症性ストレス応答の制御にも関与すると示唆されています。PDE2Aが関与する環状ヌクレオチド代謝回転の破綻は、神経精神疾患および神経変性疾患様の表現型や、心代謝機能障害と関連付けられており、疾患関連モデルにおける経路解析の標的としての有用性を支持しています。

PDE2A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDE2Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PDE2A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDE2A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDE2A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PDE2Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDE2A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPDE2A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDE2A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPDE2A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。