CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
Pdcd-1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-422150-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Pdcd-1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Pdcd-1ダブルニカースプラスミド（m）およびPdcd-1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Pdcd1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Pdcd-1 抗体 (RMP1-30): sc-56200
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Pdcd-1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-422150-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Pdcd-1 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-422150-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
プログラム細胞死1（Pdcd1；PD-1、Pdcd-1）は、主として活性化T細胞、B細胞、および骨髄系サブセットに発現する抑制性免疫受容体をコードしており、免疫活性化を抑制して末梢免疫寛容を促進する。PD-L1（Cd274）またはPD-L2（Pdcd1lg2）と結合すると、PD-1はSHPホスファターゼをリクルートしてTCR/CD28の近位シグナル伝達を減弱させ、PI3K–AKTおよびRAS–MAPK経路の活性を低下させることで、サイトカイン産生、増殖、ならびに代謝リプログラミングを制限する。このチェックポイント軸は、慢性的な抗原曝露下におけるT細胞疲弊と分化状態の形成に中心的な役割を担い、胚中心反応や自己免疫に関連する免疫調節異常にも影響する。マウスモデルでは、腫瘍免疫学、慢性感染、炎症性疾患の機序においてPdcd1機能が広く研究されており、PD-1シグナルの変化が免疫恒常性に影響を及ぼす。
Pdcd-1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Pdcd1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Pdcd1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Pdcd1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Pdcd1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。