Pdcd-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403008-ACT

PDCD1 は、プログラム細胞死タンパク質 1（PD‑1；Pdcd‑1）をコードしており、主に活性化 T 細胞およびその他の免疫細胞サブセットに発現する抑制性受容体です。PD‑1 は抗原受容体シグナル伝達を抑制することで末梢免疫寛容の維持に寄与します。リガンドと結合すると、PD‑1 はホスファターゼをリクルートして TCR シグナル伝達の近位過程を減弱させ、PI3K–AKT 経路および RAS–MAPK 経路の活性を制限し、サイトカイン産生、増殖、ならびに生存に関わるプログラムを調整します。このチェックポイント軸は免疫恒常性の中核を成し、慢性的な抗原曝露状態でしばしば関与が示されており、PDCD1 の持続的発現は T 細胞機能不全や炎症の基準点（セットポイント）の変化と関連します。そのため PDCD1 の制御は、腫瘍免疫、持続感染モデル、自己免疫、ならびに免疫関連の転写リプログラミングといった文脈で広く研究されています。

Pdcd-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDCD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Pdcd-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDCD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDCD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Pdcd-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDCD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPdcd-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDCD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPdcd-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。