PCGF6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404420-ACT

PCGF6（polycomb group ring finger 6）は、RINGフィンガーを含むポリコーム群タンパク質であり、非正規のポリコーム抑制複合体1（PRC1）アセンブリを介したエピジェネティックな転写抑制に関与します。RNF2/RING1Bや関連因子と協調することで、PCGF6はヒストンH2Aのリジン119モノユビキチン化（H2AK119ub）、クロマチンの凝縮、および幹細胞の維持・分化・細胞周期進行を制御する遺伝子発現プログラムの協調的な調節に寄与します。PCGF6に関連する制御ネットワークは、発生関連遺伝子のサイレンシングやゲノム安定性を制御する経路とも交差しており、多様ながん研究や発生生物学の文脈で観察されるクロマチン状態の破綻を理解するうえで重要です。PCGF6活性の変化は、転写可塑性や増殖関連遺伝子シグネチャーの変動と関連づけられており、エピジェネティック制御の機構研究における重要なノードとして位置づけられます。

PCGF6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PCGF6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PCGF6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PCGF6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPCGF6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PCGF6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPCGF6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPCGF6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPCGF6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPCGF6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。