Plasmide CRISPR d'Activation (h) PCDHGA11: sc-407326-ACT

PCDHGA11 code la protocadhérine gamma-A11, une protéine d’adhérence cellulaire dépendante du calcium appartenant à la famille des protocadhérines groupées, qui contribue à la reconnaissance cellule–cellule et à l’architecture tissulaire. Les protocadhérines soutiennent la signalisation dépendante du contact, l’organisation membranaire et la dynamique du cytosquelette, influençant la connectivité neuronale ainsi que des interactions plus larges entre cellules épithéliales ou immunitaires. Des modifications des profils d’expression des protocadhérines sont fréquemment associées à une adhérence dérégulée et à des programmes de lignée altérés observés dans des phénotypes neurodéveloppementaux et des processus liés au cancer. En tant que composant des réseaux d’adhérence et de récepteurs de surface, PCDHGA11 est étudié pour son impact sur l’identité cellulaire, l’organisation synaptique ou jonctionnelle et les états transcriptionnels en aval du contact intercellulaire.

PCDHGA11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PCDHGA11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PCDHGA11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PCDHGA11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PCDHGA11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PCDHGA11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PCDHGA11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PCDHGA11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PCDHGA11 dans les cellules tumorales présentant une expression de PCDHGA11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.