Pax-6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418357-ACT

PAX6は、神経外胚葉および眼系譜の規定におけるマスター制御因子として機能する、paired box/homeobox型転写因子であるPax-6をコードしている。Pax-6は、シス制御エレメントに結合し、他の発生制御因子と協調して転写ネットワークを編成することで、眼、前脳、膵島の各コンパートメントにわたり、細胞運命決定、前駆細胞の増殖、分化プログラムの制御に寄与する。PAX6の活性は、WNT、SHH、TGF-β関連の遺伝子制御回路を含む、より広範な発生シグナル伝達経路とも連携し、空間的パターニングと組織形態形成の確立に関与する。PAX6の発現や用量の破綻（不適切な制御）は、先天性の眼奇形や神経発達に関わる表現型と関連しており、ヒト系における転写制御のモデル化で広く用いられる主要なノードとなっている。

Pax-6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PAX6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Pax-6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PAX6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPAX6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Pax-6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPAX6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPax-6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPAX6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPax-6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。