PATZ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404881-ACT

PATZ1 (POZ/BTB e zinc finger 1 contendo AT-hook) é um regulador transcricional humano que se liga a DNA rico em AT e modula programas de expressão gênica que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a apoptose. Por meio de seu domínio BTB/POZ e de seus motivos “zinc finger”, o PATZ1 participa da regulação associada à cromatina e pode influenciar redes ligadas à pluripotência (stemness), ao padrão de desenvolvimento e às respostas ao estresse. A atividade desregulada de PATZ1 tem sido associada a estados transcricionais alterados observados em múltiplos contextos de doença, incluindo a biologia do câncer, na qual pode afetar a proliferação e a identidade de linhagem. Como um fator nuclear com amplo alcance regulatório, o PATZ1 é frequentemente estudado em controle transcricional, regulação epigenética e reprogramação de vias sob estímulos oncogênicos ou de diferenciação.

PATZ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PATZ1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PATZ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PATZ1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PATZ1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PATZ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PATZ1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PATZ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PATZ1 em células tumorais com expressão de PATZ1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.