Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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patched/PTCH1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400457-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- patched/PTCH1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il patched/PTCH1 Double Nickase Plasmid (h) e il patched/PTCH1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PTCH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: patched/PTCH1 Antibody (A-2): sc-518044
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
patched/PTCH1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400457-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
patched/PTCH1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400457-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTCH1 codifica il recettore umano Patched, una proteina transmembrana a 12 passaggi che funge da principale componente di legame del ligando e da elemento inibitorio della via di segnalazione Hedgehog. In assenza di ligandi Hedgehog, PTCH1 sopprime l'attività di SMO per limitare i programmi trascrizionali dipendenti da GLI che controllano il patterning embrionale, il comportamento delle cellule staminali/progenitrici e l'omeostasi tissutale. L'attività di PTCH1 è strettamente legata al traffico ciliare e alla trasduzione del segnale a livello del ciglio primario, integrando segnali di sviluppo con lo stato del ciclo cellulare e della differenziazione. Alterazioni genetiche e regolatorie di PTCH1 sono associate a una deregolazione dell'output della via Hedgehog e sono ampiamente studiate nei disordini dello sviluppo e nella biologia dei tumori guidati da Hedgehog.
patched/PTCH1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PTCH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PTCH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PTCH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PTCH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.