parvalbumin α CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401364-ACT

PVALBは、パルブアルブミンα（parvalbumin alpha）をコードする、高親和性のEFハンド型カルシウム結合タンパク質です。興奮性細胞においてCa²⁺の緩衝化と弛緩を加速することで細胞内Ca²⁺ダイナミクスを調節します。神経系では、パルブアルブミンは高速発火性のGABA作動性介在ニューロンのマーカーであり、Ca²⁺依存的な神経伝達物質放出やシナプス統合に影響することで、スパイクタイミングの精密さやネットワークオシレーションの維持に寄与します。神経回路以外でも、パルブアルブミンによるカルシウム緩衝は、筋肉における収縮—弛緩の速度特性や、その他のCa²⁺制御性の細胞プロセスに関与します。PVALB発現の変化やパルブアルブミン陽性介在ニューロンの機能異常は、神経発達および神経精神疾患様の表現型と関連づけられており、PVALBの制御は回路の興奮性やカルシウム依存性シグナル伝達を研究する上で重要です。

parvalbumin α CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PVALBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

parvalbumin α CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PVALB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPVALB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性parvalbumin αの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPVALB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるparvalbumin α依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPVALB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるparvalbumin α経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。