Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PAR4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431134
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PAR4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PAR4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PAR4 Antibody (A-10): sc-1666
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PAR4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-431134 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Mouse Pawr codifica PAR4 (prostate apoptosis response 4), una proteina ricca di prolina contenente un motivo leucine zipper, che modula programmi trascrizionali che controllano le decisioni sul destino cellulare. PAR4 promuove la segnalazione apoptotica e può antagonizzare le vie pro‑sopravvivenza, incluse interazioni che influenzano l’attività di NF‑κB e cascate di segnalazione delle protein-chinasi come le risposte dipendenti da PKC. È stata collegata alle risposte allo stress cellulare, alla differenziazione e alla regolazione del citoscheletro grazie alla sua capacità di fungere da piattaforma per complessi di segnalazione e di regolare l’espressione genica. Un’attività deregolata di PAWR/PAR4 è stata associata a soglie di apoptosi alterate nella biologia dei tumori e a processi rilevanti per infiammazione e neurodegenerazione, in cui risultano perturbate la morte cellulare indotta dallo stress e la segnalazione di sopravvivenza.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pawr in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pawr insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pawr a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAR4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pawr per lo studio della segnalazione di PAR4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pawr critici per la funzione di PAR4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pawr per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PAR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PAR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pawr. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PAR4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PAR4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pawr per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pawr definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.