PAR4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401142-ACT

PAWRは、アポトーシス促進性タンパク質であるPAR4（prostate apoptosis response-4）をコードしている。PAR4はロイシンジッパーを含む細胞運命の制御因子であり、転写ネットワークおよびストレス応答ネットワークを調節する。PAR4は、NF-κBシグナル伝達、PKC/AKT生存経路、カスパーゼ依存的な細胞死プログラムに影響を与えることで、内因性アポトーシスと増殖制御に関与し、さらに小胞体（ER）ストレスやプロテオスタシスにも役割を持つ。PAWR/PAR4活性の変化は、アポトーシス制御の破綻、上皮および神経系の恒常性の乱れと関連しており、文脈依存的に腫瘍生物学や神経変性過程との関連も示唆されている。これらの機能により、PAWRは、生存シグナル、転写制御、プログラム細胞死の間の経路クロストークを研究するうえで有用な結節点となる。

PAR4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PAWRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PAR4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PAWR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPAWR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PAR4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPAWR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPAR4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPAWR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPAR4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。