PAR-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-420265-KO-2

Panoramica

F2rl1 codifica il recettore attivato da proteasi 2 (PAR-2), un recettore accoppiato a proteine G attivato dalla scissione da parte di proteasi seriniche, che espone un ligando “ancorato” e avvia la segnalazione attraverso le vie Gq/11, Gi/o e G12/13. La stimolazione di PAR-2 mobilizza il Ca2+ intracellulare, attiva le cascate MAPK/ERK e NF-κB e promuove programmi trascrizionali associati alla produzione di citochine, alla regolazione della barriera e alla sensibilizzazione nocicettiva. Nei tessuti murini, PAR-2 è ampiamente espresso in compartimenti epiteliali ed endoteliali, nelle cellule immunitarie e nei neuroni sensoriali, dove coordina risposte infiammatorie e di rimodellamento tissutale. Un’attività di PAR-2 deregolata è stata implicata in modelli di infiammazione delle vie aeree e intestinale, dermatite, dolore e segnalazione nel microambiente tumorale, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici della biologia guidata dalle proteasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR-2 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene F2rl1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del F2rl1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto F2rl1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAR-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di F2rl1 per lo studio della segnalazione di PAR-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni F2rl1 critici per la funzione di PAR-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di F2rl1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAR-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PAR-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus F2rl1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAR-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PAR-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia F2rl1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio F2rl1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.