Pancreatic Polypeptide Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422391

Descripción general

El gen Ppy de ratón codifica el polipéptido pancreático, una hormona peptídica producida por las células PP (γ) del páncreas que modula la motilidad gastrointestinal, la contracción de la vesícula biliar y la secreción exocrina pancreática, a la vez que influye en el apetito y la homeostasis energética. A través de la señalización mediada por miembros de la familia de receptores del neuropéptido Y, el polipéptido pancreático integra las entradas autonómicas con la detección de nutrientes para coordinar respuestas digestivas y metabólicas. La alteración de la función de las células PP y de la dinámica del polipéptido pancreático se ha asociado con una desregulación del metabolismo de la glucosa, fenotipos relacionados con la obesidad y la remodelación endocrina pancreática en modelos de estrés metabólico. Por ello, Ppy se utiliza ampliamente como marcador de identidad de las células PP y como un nodo para estudiar la heterogeneidad de las células de los islotes y la comunicación intestino–páncreas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pancreatic Polypeptide (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppy en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppy junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppy tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pancreatic Polypeptide.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppy para la investigación de la señalización de Pancreatic Polypeptide, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ppy críticos para la función de Pancreatic Polypeptide
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppy para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppy. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pancreatic Polypeptide (m) y el plásmido HDR Pancreatic Polypeptide (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppy para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppy definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.