Pancreatic Polypeptide Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422391

Panoramica

Il gene murino Ppy codifica il polipeptide pancreatico, un ormone peptidico prodotto dalle cellule PP (γ) del pancreas che modula la motilità gastrointestinale, la contrazione della colecisti e la secrezione esocrina pancreatica, influenzando al contempo l’appetito e l’omeostasi energetica. Attraverso la segnalazione mediata da membri della famiglia dei recettori del neuropeptide Y, il polipeptide pancreatico integra gli input autonomici con il rilevamento dei nutrienti per coordinare le risposte digestive e metaboliche. Un’alterata funzione delle cellule PP e una dinamica anomala del polipeptide pancreatico sono state associate a una disregolazione del metabolismo del glucosio, a fenotipi legati all’obesità e al rimodellamento endocrino del pancreas in modelli di stress metabolico. Ppy è quindi ampiamente utilizzato come marcatore dell’identità delle cellule PP e come nodo per lo studio dell’eterogeneità delle cellule delle isole pancreatiche e della comunicazione intestino–pancreas.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pancreatic Polypeptide (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppy in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppy insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppy a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pancreatic Polypeptide.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppy per lo studio della segnalazione di Pancreatic Polypeptide, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppy critici per la funzione di Pancreatic Polypeptide
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppy per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppy. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pancreatic Polypeptide Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Pancreatic Polypeptide (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppy per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppy definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.