PAI-1/SERPINE1 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-422287-ACT-2

マウスSerpine1はプラスミノーゲンアクチベーター阻害因子-1（PAI-1）をコードしており、PAI-1は分泌型セピンとして組織型およびウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーター（tPA/uPA）を阻害し、プラスミン産生を抑制することで線溶、細胞周囲のタンパク質分解、ならびに細胞外マトリックスのリモデリングを調節する。PAI-1はTGF-β、炎症性サイトカイン、酸化ストレス経路からのシグナルを統合して細胞接着や遊走、組織修復に影響を及ぼし、その下流で創傷治癒や線維化リモデリングを左右する。Serpine1/PAI-1発現の制御異常は血栓性および出血性の表現型、肥満に伴う代謝性炎症、臓器線維化と関連しており、止血、血管生物学、慢性炎症病態の機序研究における重要な標的となる。マウスモデルにおけるSerpine1の遺伝子編集や機能攪乱は、プロテアーゼ—抗プロテアーゼのバランス、マトリックス代謝回転、そして炎症とリモデリングを結び付けるシグナルネットワークを、生体内および細胞ベースアッセイで機能的に解析することを可能にする。

PAI-1/SERPINE1 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Serpine1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PAI-1/SERPINE1 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Serpine1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSerpine1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PAI-1/SERPINE1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSerpine1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPAI-1/SERPINE1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSerpine1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPAI-1/SERPINE1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。