PACE4 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-405605-ACT-2

ヒトPCSK6はプロプロテインコンバターゼであるPACE4をコードしており、PACE4は分泌され細胞外マトリックスに関連するセリン型エンドプロテアーゼとして、分泌経路内および細胞表面において対になった塩基性残基を切断することで多様な前駆体タンパク質を活性化する。PACE4は成長因子、受容体、メタロプロテイナーゼ、細胞外マトリックス成分などをプロセシングすることでプロテオスタシスと細胞間シグナル伝達に寄与し、その結果、発生、組織リモデリング、細胞移動に関連する経路に影響を及ぼす。PCSK6/PACE4活性の制御異常は、がん進行、心血管系形質、ならびに炎症性または線維化を伴うリモデリングの状況におけるプロテオリティックネットワークの変化と関連づけられている。PCSK6の遺伝子編集および機能撹乱ツールは、コンバターゼ依存的な基質成熟の機構解析、セクレトームのプロファイリング、そしてヒト細胞モデルにおけるプロテアーゼ制御下のシグナル回路の解明を可能にする。

PACE4 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PCSK6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PACE4 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における PCSK6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPCSK6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PACE4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPCSK6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPACE4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPCSK6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPACE4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。