PACAP Double Nickaseプラスミド (h): sc-402741-NIC

ADCYAP1は下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（PACAP）をコードしている。PACAPは主にPAC1（ADCYAP1R1）およびVPAC受容体を介してシグナルを伝達し、cAMP/PKA系、PLC/Ca²⁺系、ならびに下流のCREBおよびMAPKによって制御される転写プログラムを活性化する。PACAPは神経細胞の興奮性、神経内分泌分泌、ストレス応答回路を調節し、さらにGPCR媒介性シグナル伝達を通じて免疫機能や血管機能にも影響を及ぼす。細胞モデルでは、ADCYAP1の活性はシナプス可塑性、代謝恒常性、神経炎症のトーンを制御する経路と交差する。PACAPシグナルの破綻は、ストレスや痛みの処理の変化、片頭痛関連メカニズムなどを含む神経学的・神経精神医学的表現型と関連づけられており、ADCYAP1はGPCR‐ニューロペプチド生物学の機構研究における重要な標的となっている。

PACAP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADCYAP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADCYAP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADCYAP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADCYAP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。