p73 Double Nickaseプラスミド (m2): sc-423511-NIC-2
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- p73 Double Nickaseプラスミド (m2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- p73ダブルニカースプラスミド（m2）およびp73ダブルニカースプラスミド（m22）は、Trp73を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: p73 抗体 (5B429): sc-56191
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
p73 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-423511-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのTrp73遺伝子は、p53ファミリーに属する転写因子p73をコードしており、DNA損傷応答に関与する標的遺伝子を状況依存的に活性化することで、細胞周期停止、アポトーシス、ゲノム安定性の維持を制御するプログラムを調節する。p73はまた、神経新生や上皮分化などの発生過程にも寄与し、E2F駆動性転写、TGF-β関連の制御、ストレス応答性キナーゼ経路といったシグナル伝達ネットワークとも連携する。Trp73のアイソフォームバランスおよびp73媒介性転写の破綻は、腫瘍抑制機能の変化、染色体不安定性、組織恒常性の異常と関連づけられており、がん生物学や発生表現型の理解に重要である。マウスモデルにおけるTrp73の遺伝子編集は、ストレス応答や疾患関連の細胞状態の基盤となる、アイソフォーム特異的機能、転写回路、ならびに経路間相互作用の機序解明を可能にする。
p73 ダブルニカースプラスミド（m2）は、mouse 細胞株における Trp73 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Trp73内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Trp73の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Trp73が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。