p53R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402192

概要

RRM2Bはp53R2をコードしており、p53によって誘導されるリボヌクレオチド還元酵素の小サブユニットとして、DNA合成および修復に必要なデオキシリボヌクレオチドを供給します（特にストレス条件下）。p53R2はミトコンドリアDNAの維持を支えるほか、dNTPプールを維持することで複製ストレス下の酸化還元バランスと細胞生存にも寄与します。機能的には、DNA損傷応答、p53シグナル伝達、ヌクレオチド代謝を結び付け、ゲノム安定性やチェックポイント制御に影響を及ぼします。RRM2Bの制御異常は、ミトコンドリアDNA枯渇に関連する表現型や、がんにおけるストレス適応と関連づけられており、ゲノム維持機構や代謝リプログラミングの研究において重要です。

p53R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRRM2B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RRM2B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RRM2Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、p53R2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、p53R2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RRM2B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• p53R2の機能に不可欠なRRM2Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RRM2Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• p53R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびp53R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RRM2B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  p53R2 HDRプラスミド（h）および p53R2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRRM2Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRRM2B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。